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食品中合成著色劑的測定

參考GB 5009.35-2023標(biāo)準(zhǔn)

合成著色劑
合成著色劑具有著色力強、色澤鮮艷、不易褪色、成本低等優(yōu)點，主要作用是改善食品的感官性狀，增加食品的色澤，促進食欲。不法廠家為了使飲品、糕點、醬鹵制品呈現(xiàn)誘人的色澤，違規(guī)使用人工合成著色劑。長期或一次性大量食用色素含量超標(biāo)的食品，可能會引起過敏、腹瀉等癥狀，當(dāng)攝入量過大，超過肝臟負荷時，會在體內(nèi)蓄積，對腎臟、肝臟產(chǎn)生一定的傷害。GB 2760-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中收載的合成著色劑有11種，分別為檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、喹啉黃、赤蘚紅和酸性紅，并對其允許使用的食品類型和使用限量做出了明確規(guī)定。

方法優(yōu)勢
迪馬科技參考《GB 5009.35-2023 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測定》，建立了食品中合成著色劑的測定方法，采用ProElut^® PWA-2固相萃取柱凈化，HPLC-PDA檢測。該方法具有提取方法簡單、回收率高、凈化效果優(yōu)異、方法穩(wěn)定性好等特點。

注意事項：

1、關(guān)于色譜條件，不同色譜儀器由于死體積不同，采用Diamonsil^® C18(2)色譜柱時，可使用標(biāo)準(zhǔn)原方法梯度程序，也可以適當(dāng)延長流動相初始比例時間（如本文所示）,以增加檸檬黃和新紅分離度。另外，標(biāo)準(zhǔn)中采用甲醇作為有機相，也可使用乙腈，分離度更好、基線更加平穩(wěn)，具體方法可致電質(zhì)詢

2、提取液濃縮時間控制在40-50min之間，不宜過長，以免造成回收率損失。

3、洗脫液氮吹到0.5mL，剩余液體不宜過少，以避免氮吹影響，同時剩余液體也可減少濾膜過濾對化合物吸附。

4、樣品凈化濃縮，定容后的液體，用0.45μm親水PTFE濾膜過濾（Cat.#:30109），過濾時需要棄去5滴初濾液，樣品液體初期接觸濾膜，目標(biāo)物在濾膜上少量吸附，待濾膜吸附目標(biāo)物飽和后，取續(xù)濾液上機分析。

1、適用范圍

本方案適用于果粒橙、葡萄酒、綠豆糕、帶餡兒面包、棒棒糖、話梅、果凍、火腿、醬牛肉等食品中檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍、喹啉黃、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅、亮藍和赤蘚紅11種合成著色劑的測定。

2、標(biāo)準(zhǔn)品配制

(1) 單標(biāo)儲備液1000μg/mL：稱取適量合成著色劑單標(biāo)，用水配制成1000μg/mL的單標(biāo)儲備液。

(2) 混標(biāo)中間液50μg/mL：分別吸取0.5mL單標(biāo)儲備液1000μg/mL于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，配制成50μg/mL的混標(biāo)中間液。

(3) 混標(biāo)中間液10μg/mL：分別吸取0.1mL單標(biāo)儲備液1000μg/mL于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，配制成10μg/mL的混標(biāo)中間液。

3、提取

3.1 液體類試樣（果粒橙、葡萄酒）

(1) 取2.0g樣品于50mL具塞離心管中，加入25mL乙醇氨水溶液，振蕩1min，5000rpm下離心5min，收集上清液于50mL容量瓶中，并用乙醇氨水溶液定容至50mL，即得提取液；

(2) 準(zhǔn)確吸取10mL提取液，50℃水浴下氮氣吹至3mL，分2-3次共加入10mL 5%甲醇水溶液溶解，待凈化。

3.2 固體類試樣（綠豆糕、帶餡兒面包、棒棒糖、話梅、果凍）

(1) 取2.0g樣品于50mL具塞離心管中，加入2mL水，50℃水浴加熱混勻樣品，加入25mL乙醇氨水溶液，振蕩1min，50℃水浴超聲提取20min，8000rpm下離心5min，收集上清液于50mL容量瓶中；

(2) 向下層殘留物中加入10mL乙醇氨水溶液，按照步驟(1)重復(fù)提取一次，合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50mL；

(3) 準(zhǔn)確吸取10mL提取液，50℃水浴下氮氣吹至3mL，分2-3次共加入10mL5%甲醇水溶液溶解，待凈化。

3.3 含油量較大的試樣（火腿、醬牛肉）

(1) 取2.0g樣品于50mL具塞離心管中，加入20mL石油醚，振蕩1min，超聲提取10min，8000rpm離心5min，棄去上清液，加入25mL乙醇氨水溶液，振蕩1min，50℃水浴超聲提取20min，8000rpm下離心5min，收集上清液于50mL容量瓶中；

(2) 向下層殘留物中加入10mL乙醇氨水溶液，按照步驟(1)重復(fù)提取一次，合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50mL；

(3) 準(zhǔn)確吸取10mL提取液，50℃水浴下氮氣吹至3mL，分2-3次共加入10mL 5%甲醇水溶液溶解，待凈化。

乙醇氨水溶液：700mL無水乙醇，4mL氨水，用水定容至1000mL。

提取液濃縮時間控制在40-50min之間，不宜過長。

4、凈化

ProElut^® PWA-2 150mg/6mL（Cat.#:65815）

(1)活化：依次加入6mL甲醇、6mL水，流出液棄去；

(2)上樣：將待凈化液加入柱中，控制流速2s/滴，棄去流出液；

(3)淋洗：依次加入6mL 2%甲酸水溶液、6mL甲醇，控制流速約2s/滴，棄去淋洗液，真空抽干2min(或不抽干)；

(4)洗脫：分兩次加入6mL 2%氨水甲醇溶液，每次3mL，控制流速約3s/滴，收集洗脫液；

(5)重新溶解：將洗脫液在50℃水浴下氮氣吹至約0.5mL，用乙酸銨(20mM,pH9.0)定容至2mL，渦旋混勻，用0.45μm親水PTFE濾膜過濾，棄去5滴初濾液，取續(xù)濾液上機分析。

5、分析條件

儀器：LC-2040C

色譜柱：Diamonsil^® C18(2) 250×4.6mm，5μm（Cat.#：99603）

流速：1.0mL/min  

進樣量：10μL

柱溫：30℃

檢測器：PDA 400-800nm

流動相：A:甲醇 B:0.02mol/L 乙酸銨溶液

梯度設(shè)置

6、添加回收結(jié)果

食品中人工合成著色劑的HPLC檢測的添加回收結(jié)果。

添加濃度30mg/kg(加標(biāo)量:50μg/mL,1.2mL)

添加濃度1.5mg/kg(加標(biāo)量:10μg/mL,0.3mL)

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