免疫親和柱的原理：
本實(shí)驗(yàn)測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體間的特異性反應(yīng)。單克隆抗體被偶聯(lián)在柱內(nèi)凝膠上，樣品中的經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾、稀釋?zhuān)蝗缓髮悠诽崛∫和ㄟ^(guò)鍵合有抗體的親和柱。
此時(shí)，鍵合在親和柱中的抗體上。之后用蒸餾水將親合柱上的雜質(zhì)除去。用甲醇洗脫親和柱，將從抗體上分離下來(lái)。將過(guò)濾的甲醇溶液注入熒光計(jì)或HPLC進(jìn)行測(cè)定。
特點(diǎn)：
1、采用定向偶聯(lián)技術(shù)，抗體載量大，有效柱容量高。所有親和柱產(chǎn)品柱容量均滿足國(guó)標(biāo)對(duì)于商品化柱容量的要求；
2、凝膠粒徑均勻，過(guò)柱自然流速即可，不需額外加壓；
3、采用抗體定向偶聯(lián)技術(shù)，樣本回收率高；
4、操作簡(jiǎn)便，可洗脫后直接進(jìn)樣，無(wú)需氮吹。
免疫親和柱的使用要點(diǎn)：
1、上柱的樣品溶液應(yīng)該保持酸堿中性、無(wú)懸浮物、甲醇濃度不宜過(guò)高；
2、若樣品為復(fù)雜樣品，例如高蛋白、高油脂、酸性樣品，可以將提取液分兩次提取樣品，可以提高提取效果；
3、樣品過(guò)柱及甲醇洗脫速度要慢且均勻，約每秒1-2滴；
4、抗原抗體發(fā)生反應(yīng)的最佳溫度是在25℃左右，實(shí)驗(yàn)需要的環(huán)境溫度最好是室溫24℃-28℃，太高或太低的溫度都會(huì)對(duì)回收率有一定的影響。在使用前需要恢復(fù)至室溫再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；
5、不要在無(wú)水狀態(tài)下，瓊脂容易干燥萎縮，影響質(zhì)量；
6、儲(chǔ)存條件為4℃-8℃。切記0℃以下的低溫，因?yàn)榫彌_液凍結(jié)，會(huì)嚴(yán)重影響親和柱內(nèi)的物理結(jié)構(gòu)，對(duì)質(zhì)量影響很大；
7、洗脫一般選擇試劑甲醇，為增強(qiáng)洗脫效果可加大甲醇體積；
8、樣液免疫凈化后，洗脫液過(guò)0.45um或更小孔徑濾膜效果更好。
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